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  2. 技術文章

    大鼠小梁網細胞操作要點

           大鼠小梁網細胞在房水流動機制中發揮重要作用。在大鼠小梁網細胞中有特定的神經遞質和神經肽受體,其中包括腎上腺素,乙酰dan堿和神經肽Y。在小梁細胞中,一長串的血管活性多肽和生長因子能夠觸發細胞內信號傳導機制。小梁網細胞可合成不同類型的細胞外基質蛋白以及金屬蛋白酶。公司提供的大鼠小梁網細胞,采用胰mei消化制備而來。細胞的培養采用公司專li產品大鼠小梁網細胞培養試劑盒(RatEyePrimaCell:NormalTrabecularMeshworkCellsCatNo.3-7526)來優化目的細胞生長條件,以降低雜細胞(如脂肪細胞、纖維細胞等)的污染,同時保證質量的穩定。在公司技術部標準的操作流程下,大鼠小梁網細胞傳5代仍可以保持原代細胞的分化狀態,進而可以用于評估體外藥物模型系統和調節特定基因的遺傳功能。

    大鼠小梁網細胞操作要點:

    1)將培養基在37℃水浴鍋預熱;準備一個15mL無菌的離心管,加入8mL預熱培養基。

    2)將凍存細胞從液氮罐中取出,快速放入37℃水浴鍋中復溫(可準備一潔凈的燒杯,裝滿37℃的水,細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內,再逐步轉移到水浴鍋中)。輕輕晃動凍存管,使細胞能在1~2min內完全解凍,使細胞能盡快通過最易受損的溫度段(-5~0℃)。注意凍存管管口不能沒入水中,BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。

    3)用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內,將管內細胞轉移至準備好的離心管內,輕輕吹打液體,使細胞均勻分散,降低DMSO濃度,吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次,均轉移至離心管內。

    4)800rpm離心5min,棄上清,加入新鮮的培養基,吹打制成細胞懸液。

    5)將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內,補加適量的培養基,輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻,放入溫箱內培養。

    6)第二天觀察細胞貼壁生長情況,換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養,待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代,細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。


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