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  2. 新聞中心

    降鈣素ELISA試劑盒的正確操作步驟一起來了解下

           降鈣素ELISA試劑盒實驗原理:用純化的PCT抗體包被微孔板,制成固相載體,往微孔中依次加入標本或標準品、化的PCT抗體、HRP標記的親和素,經過徹底洗滌后用底物(TMB)顯色。TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的PCT呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(值),計算樣品濃度。
      降鈣素ELISA試劑盒操作步驟:
      實驗開始前,各試劑均應平衡至室溫,試劑不能直接在37溶解;試劑或樣品配制時,均需充分混勻,混勻時盡量避免起泡。實驗前應預測樣品含量,如樣品濃度過高時,應對樣品進行稀釋,以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍,計算時再乘以相應的稀釋倍數。
      1、加樣:分別設空白孔、標準孔、待測樣品孔??瞻卓准訕悠废♂屢?00,余孔分別加標準品或待測樣品100,注意不要有氣泡,加樣時將樣品加于酶標板底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻,酶標板加上蓋或覆膜,37溫育2小時。為保證實驗結果有效性,每次實驗請使用新的標準品溶液。
      2、棄去液體,甩干,不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液100(臨用前配制),酶標板加上覆膜,37溫育1小時。
      3、棄去孔內液體,甩干,洗板3次,每次浸泡1-2分鐘,大約400/每孔,甩干(也可輕拍將孔內液體拍干)。
      4、每孔加檢測溶液B工作液(臨用前配制)100,加上覆膜,37溫育1小時。
      5、棄去孔內液體,甩干,洗板5次,方法同步驟3。
      6、每孔加底物溶液90,酶標板加上覆膜37避光顯色(反應時間控制在15-30分鐘,當標準孔的前3-4孔有明顯的梯度藍色,后3-4孔梯度不明顯時,即可終止)。
      7、每孔加終止溶液50,終止反應,此時藍色立轉黃色。終止液的加入順序應盡量與底物液的加入順序相同。
      8、立即用酶標儀在450nm波長測量各孔的光密度(值)。
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